《생물공학부문에서는 세포공학과 유전자공학, 미생물공학을 비롯한 현대생물학의 발전에 큰 힘을 넣으며 현대생물학의 성과를 농업과 축산업, 의학과 식료공업에 널리 받아들여 생산성이 높은 농작물과 집짐승의 새 품종을 만들어내며 질좋은 여러가지 의약품과 식료품을 많이 생산할수 있도록 하여야 합니다.》 (
유전자공학과 같은 선진생물공학기술을 발전시키고 그 성과를 적극 활용하면 인민들의 건강증진에 이바지하는 효능높은 약물과 제품들을 더 많이 생산하여 우월한 우리 나라 보건제도의 우월성을 더욱 높이 발양시킬수 있다. 고초균피브린분해효소는 반감기가 길고 출혈성부작용이 없으며 혈전에 대한 직접 및 간접용해작용을 다같이 나타내는것으로 하여 혈전성질병치료에서 중요한 혈전용해약물로 주목되고있다. 고초균피브린분해효소를 생산하기 위한 Bacillus subtilis natto-89의 배양과정에는 배양액속에 폴리-γ글루타민산과 같은 점성물질이 함께 분비되여 효소의 거둠률을 떨어뜨리는 요인으로 되고있다. 이로부터 우리는 선진적인 유전자공학기술을 도입하여 고초균피브린분해효소유전자를 클론화하고 고초균피브린분해효소를 발현시키는 효모균주를 새롭게 육종하였다.
GenBank에 등록되여있는 고초균피브린분해효소유전자배렬(등록번호 FJ374767, S51909, AF368283, AY219901, AY895162, AY940167, D25319, EF061456, EF474344, FJ376817)에 근거하여 고초균피브린분해효소의 프로펩티드와 성숙펩티드암호화령역(proNK)을 증폭하기 위한 프라이머를 설계하고 합성하였다. 설계합성한 프라이머를 가지고 Bacillus subtilis natto-89의 게놈DNA로부터 proNK유전자를 증폭하고 pGEM®-T easy vector에 클론화하였다. 클론화된 유전자는 GenBank에 등록된 고초균피브린분해효소유전자들과 98%이상의 상동성을 가진다.
pGEM®-T easy vector에 재조합된 proNK유전자를 제한효소EcoRI, NotI를 리용하여 분리해내고 효모발현운반체 pPIC9K에 재조합하였다. 재조합운반체(pPIC9K-proNK)를 전기천공법으로 효모발현숙주 Pichia pastoris GS115에 형질전환시켰다.
선발된 재조합효모균주Pichia pastoris GS115(pPIC9K-proNK)는 메타놀유도배양을 진행할 때 SDS-PAGE상에서 크기가 28KDa되는 재조합단백질을 분비하였으며 배양상등액의 피브린분해활성은 2 300IU/mL였다.
